Cromatografía de sustancias incoloras

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La cromatografía en capa delgada es un procedimiento simple y económico que permite: 

 Determinar el número de componentes en una mezcla. 
 Determinar la identidad de compuestos, utilizando sustancias patrón que sirvan de referencia. 
 Monitorear el progreso de una reacción. 
 Determinar la efectividad de una purificación, empleándola como criterio de pureza. 
 Determinar las condiciones apropiadas para una separación por cromatografía.
detectar Cantidades de compuestos del orden de los nanogramos (10-9 G)
En una primera aproximación es un método que permite separación de mezclas de dos o más compuestos. La separación se logra por la distribución de los compuestos entre dos fases: – la fase estacionaria, sólida y por lo general extremadamente polar, que se halla uniformemente adherida a Una placa o soporte delgado de aluminio – la fase móvil, líquida, formada por un solvente o mezcla de solventes elegidos cuidadosamente de acuerdo Con las sustancias a separar. 

1. Siembra. La placa de cromatografía es una lámina de vidrio, de metal o de plástico que es cubierta con una delgada Capa de un sólido adsorbente1 , que habitualmente es sílica gel o alúmina (fase estacionaria). Estas placas Pueden realizarse de manera artesanal, o se pueden utilizar placas comerciales que ya traen dispuesta la Sílica gel de manera uniforme. Sobre esa placa se traza con lápiz una línea de siembra donde se depositará Una pequeña cantidad de la muestra a analizar cerca del extremo inferior de la placa (ver Figura 1.1). 

2. Desarrollo La placa se ubica en una cámara de desarrollo que consiste en un vaso de precipitados conteniendo la fase Móvil (no más de 1 cm de alto de solvente), y debe ser tapado cuidadosamente para que los vapores de los Solventes utilizados saturen el recipiente. La parte inferior de la placa se debe sumergir en el líquido Figura 1.2 (desarrollo). La fase móvil lentamente va subiendo a través de la placa por capilaridad interactuando con la muestra y con la fase estacionaria, generándose el desplazamiento selectivo de cada Uno de los componentes. Una vez concluido el desarrollo, se procede al revelado de la placa.

3. Revelado Muchos compuestos orgánicos son blancos e incoloros en solución, por lo que no son detectables a simple Vista sobre la placa cromatográfica luego del desarrollo. Por ello es necesario hacerlas evidentes mediante el Revelado. Existen varios métodos de revelado. Uno de los más empleados es el revelado con luz UV. La fase Estacionaria contiene un indicador fluorescente que al ser irradiado con luz ultravioleta se observa de color Verde. Muchas sustancias orgánicas absorben la energía provista por la lámpara, evidenciándose como Manchas oscuras (rosadas) sobre el fondo brillante. Éste es el método que se usa en el TP 

Cromatografía de adsorción


Visión microscópica del proceso cromatográfico El proceso de cromatografía de adsorción se basa en la separación de los componentes de una mezcla entre Una fase sólida de adsorbente y una fase móvil (líquida). La adsorción es un proceso por el cual átomos, iones o moléculas son atrapados o Retenidos en la superficie de un material, por interacciones de tipo dipolo-dipolo y Formación de puentes de hidrógeno. El soluto es adsorbido en la superficie del adsorbente y luego desorbido por el Solvente de fase móvil. Si se trata de una mezcla de solutos, el más fuertemente Atraído por el adsorbente será el que “corre” o se desplaza menos. En la corrida Cromatográfica de la Figura 1, el más fuertemente atraído a la fase estacionaria Corresponde a la mancha que corríó una distancia “a”. La polaridad de los solutos determina la intensidad de la interacción con la fase estacionaria. La polaridad de la fase móvil, por otro lado, también es importante: un solvente de desarrollo muy polar Tiene una fuerza de elución grande y remueve a su paso a la muestra, que ya no queda ligada al adsorbente. Para poder medir el desplazamiento alcanzado por cada componente de la mezcla, con una medida que Resulte independiente del tiempo y de las dimensiones de la placa, se utiliza el concepto de Relación de Frente (Rf); y se lo define como el cociente entre la distancia recorrida por el compuesto y la distancia Recorrida por el solvente de desarrollo. Esto se muestra en la Figura 2. Se deduce entonces que el Rf es una Medida de la movilidad de un compuesto en un proceso cromatográfico. De la definición se desprende que El valor de Rf es siempre menor o igual a la unidad.

Criterio de identificación y criterio de pureza


Las variables que afectan al valor de Rf son muchas (temperatura, saturación de la Cuba, etc), por lo que Habitualmente se siembran los patrones de sustancias puras en la misma placa cromatográfica en que se Corre la muestra. Puede ocurrir que distintas sustancias tengan el mismo valor de Rf cuando se las siembra en la misma placa. Por lo tanto, si la sustancia incógnita y el patrón con la que se la compara en la misma corrida cromatográfica Dan valores de Rf distintos, se puede asegurar que no se trata del mismo compuesto. Sin embargo, si tienen La misma movilidad, no es seguro que sean idénticas. Frecuentemente se utiliza a la cromatografía en capa delgada para verificar la pureza de un compuesto. Si Luego de un desarrollo cromatográfico una muestra se presenta como varias manchas, se puede asegurar Que la misma no es pura (no está formada por un único componente). En cambio, si aparece una mancha única, puede haber ocurrido que en esas condiciones experimentales no se haya logrado separar la sustancia De las impurezas.

El objetivo de esta guía es que el alumno comprenda el fundamento y aplicaciones de la técnica de Cromatografía en capa delgada, reconociendo cada una de las variables a tener en cuenta para su Realización. 


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