Mecanismos que determinan la separacion en cromatografia en papel

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Papel como identificar lignina y para que tipo de papel:


La lignina es propia de los papeles con pasta mecánica de madera u otras fibras lignificadas. Sobre un sector sin texto se realizo un ensayo a la gota con: ·

Sulfato de anilina

Se le agregó una gota de Ácido Sulfúrico. Si la reacción es positiva da amarillo, el cual puede variar de acuerdo a la proporción de la pasta mecánica. ·

Floroglucinol

Se le agrega 25 ml de ácido clorhídrico. Si la reacción es positiva da rojo/violeta. Para que la determinación sea positiva, los dos reactivos (A y B) deberán dar la coloración antes mencionada; si uno diera y otro no se toma como negativo.

Determinación de las cargas


Para se mide un papel de 3cm2, se lo coloca sobre el crisol y se debe pesar. Se registra un valor de 12,450 g (crisol + muestra)
. Se ubica directamente sobre el mechero hasta que el crisol quede con una tonalidad rojiza. (calentar al rojo). Se debe calcinar el crisol con la tapa correspondiente ya que al entrar en contacto la combustión con el oxigeno se puede perder la muestra. Una vez hecho esto se sitúa el crisol en un desecador, se espera a que éste se enfríe y se pesa nuevamente dando un valor de 12,102 g, para llevarlo a peso constante se lo expone nuevamente el crisol con las cenizas a fuego, dejándolo enfriar a continuación y pesándolo logrando como resultado 12,073 g; esto se realiza tantas veces como sea necesario para conseguir que el peso sea constante, es decir, cuando la diferencia maneja con un rango de 1. Se vuelve a repetir lo anterior y en este último pesaje se adquiere un valor de 12,072 g. El punto final de la combustión es cuando las cenizas viran a un color blanco, una vez  hecho esto se debe verificar nuevamente el peso las veces que fueran necesarias hasta que los valores no varíen demasiado. Hecho esto se obtiene un valor estable de 12,138 g (crisol + cenizas).


Cromatografia:


Sobre la placa cromatográfica se marca suavemente con lápiz una línea a 1 cm. del borde inferior, y sobre la misma se realiza el depósito de las muestras, a esta línea se la denomina “línea de siembra”.  El procedimiento de la siembra se realiza sobre la plancha calefactora para así se va evaporando el disolvente (NAKAMURA en este caso) y se transfiere la tinta del  fragmento de papel a la placa. El diámetro de las manchas que se producen al efectuar ese depósito debe ser pequeño de modo que no haya excesiva difusión de la muestra (2 mm. De diámetro). Cada uno de los lugares elegidos para esta operación se denomina “punto de siembra” y la separación entre ellos debe ser suficiente para evitar superposiciones de las distintas muestras. Una vez realizada la siembra y habiéndose completado el secado de las muestras, se coloca la hoja la placa con el borde inferior “pescando” en el solvente que se utilizará como fase móvil, teniendo la precaución de que el nivel del líquido no supere la altura de la línea de siembra. La instalación de la placa se realiza dentro de un recipiente que se denomina “cuba cromatográfica”, el cual tiene las dimensiones apropiadas para contener a la misma, fondo plano de manera de garantizar el nivel del solvente todo a lo ancho del soporte, y una tapa que asegure el cierre hermético, de manera de garantizar la saturación del ambiente en donde se efectuará el procedimiento, y evitar la evaporación del solvente (fase móvil), a medida que vaya ascendiendo por el soporte. El ascenso del líquido (fase móvil) se produce por acción capilar y los componentes de la muestra se separarán dependiendo de su solubilidad y del grado de retención del soporte. Es decir cuanta mayor afinidad entre la muestra y el solvente mayor será el recorrido efectuado por la misma. Este ascenso se permite hasta que el solvente llegue aproximadamente al 80 % de la altura del soporte, momento en donde se retira el mismo del interior de la cuba cromatográfica, se marca el nivel alcanzado por el solvente y se pone nuevamente a secar sobre la plancha calefactora para que se evapore el solvente.


Lectura de la placa: La ubicación de las distintas sustancias sobre la placa una vez efectuado el corrimiento, se realiza según las distintas circunstancias; 1. Por observación directa si se trata de sustancias coloreadas 2. Por fluorescencia o absorbancia a la radiación U.V. o I.R., 3. Aspersión en condiciones apropiadas de la hoja de papel con algún reactivo que produzca con las sustancias analizadas una reacción coloreada, Cualquiera de estas operaciones constituye el “Revelado” del cromatograma. Una vez ubicadas cada una de las sustancias, con alguno de los métodos propuestos se compara el comportamiento de las muestras con los testigos indubitados, que se corrieron simultáneamente, observando si hay o no similitud entre los recorridos efectuados y los efectos obtenidos con el revelado, si hay coincidencia se concluye que la sustancia problema “puede” ser similar al testigo en cuestión. Si no hay coincidencia “se descarta” la posible identidad. Con la finalidad de independizarse del tiempo que se permita ascender al solvente por capilaridad en el papel, se establece un parámetro que se denomina “Relación de frentes (Rf) que es el cociente entre la distancia que se desplazó cada una de las muestras, medidas desde el centro de la mancha hasta la línea de siembra y la distancia recorrida por el solvente también a partir de la línea de siembra. El valor numérico de este parámetro oscilará entre 0 y 1 y es característico para cada sustancia, respetando la calidad del papel y la composición del solvente.

Que es el rf como se calcula:


Z


Que es una reaccion a la gota: Ensayos a la gota: consiste en tomar una gota de reactivos y depositarla directamente sobre el trazo, según la habilidad del operador podrá trabajar con gotas más pequeñas, para que el daño sea mínimo, sobre todo cuando los trazos a analizar resultan de mínimo tamaño.

CARGAS: Determinación de los componentes de las cenizas


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Determinación de presencia de carbonato (CO3=):

A la muestra se le agregan 10 gotas de Ácido clorhídrico (HCl) al 20% (agregándose en pequeñas fracciones), observándose burbujeo (desprendimiento de CO2), esto indica la presencia de CO3, se le agrega suficiente cantidad hasta que no burbujeé más. Cenizas + HCl CO2 burbujeo Esto indica la presencia del anión carbonato. ·
Determinación de la presencia de sulfato (SO4=): Para realizar esta determinación se debe colocar dentro del tubo de ensayos que contiene a la muestra, gota a gota, cantidad suficiente de Cloruro de bario (Cl2Ba), en presencia del sulfato se va a observar un precipitado blanco de Sulfato de bario (SO4Ba)

ENCOLANTES:


 

Ensayo para la identificación del almidón:

Este puede realizarse mediante dos técnicas diferentes: ·

Ensayo a la gota:

Consiste en utilizar micro – capilares para poner en contacto la muestra con una solución diluida de Lugol. Si se desarrolla una coloración azul o violeta indica la presencia de almidón. · Por raspado de la superficie del papel con un elemento filoso (bisturí, hoja de afeitar, etc.), el polvillo obtenido se coloca sobre el portaobjetos, se le agrega una gota de agua destilada y luego el reactivo Lugol Diluido. Se desarrollará un color azul /azul violeta y se podrá observar los gránulos al microscopio.

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