Fundamentos de Laboratorio: Espectrofotometría, Dilución y Técnicas de Biología Molecular

Explica qué es un “blanco” en un ensayo espectrofotométrico


En espectrofotometría es akella condición experimental q incluye todos los reactantes involucrados en una reacción excepto uno de los componentes que podría iniciar la reacción. El volumen final y las concentraciones de los reactantes es exactamente igual al del resto d las reacciones a determinar. Al medir la absorbancia de un compuesto q aparece tras el transcurso de una reacción a una longitud de onda- en la q tiene su máximo de absorbancia- con una concentración debemos saber antes cuanta absorbancia a esa longitud de onda es debida al resto de los componentes de la reacción y por tanto restatla de la q aparece dspues. De esta forma al fijar el blanco como 0 de absor podemos estar seguros de q toda la absorbancia q midamos dspues es debida a la aparición del compuesto producto de interés.

En relación a la utilidad del espectrofotómetro, explica brevemente la relación entre absorbancia a una longitud de onda dada y concentración de una sustancia dada

Definiendo la absorbancia como un valor adimensional que se obtiene al dividir 2 intensidades de luz y que mide la cantidad de intensidad de luz que absorbe una muestra, decimos que la medida de la absorción de la luz mediante un espectrofotómetro se utiliza, por tanto, para detectar e identificar moléculas y para medir su concentración en solución. La intensidad de color es proporcional a la concentración del compuesto que se mide, mientras que la cantidad de luz absorbida es proporcional a la intensidad del color y por lo tanto a la concentración. // La relación entre I (longitud de paso de la luz) e Io ( Intensidad inicial) depende de la longitud del medio absorbente (Ley de Lambert) y de la concentración de la solución absorbente (Ley de Beer). Estos factores se hayan relacionador en la ley de Lambert – Beer.    [ I = Io x 10^-Ecl] donde c es la concentración de la sustancia

.


 Describe brevemente cómo preparar en el laboratorio 150 mL de una solución 0.2 N de HCl a partir de una solución  concentrada de HCl 5 N

Tenemos una disolución a 5N. Queremos preparar una de 150ml a 0,2N. Para saber cuanta cantidad tenemos que coger:x—-0,2

150—-5 —–


à  x=6ml   y se tiene que cumplir que    :  X.5 = 150×0,2  // Con lo cual tenemos que coger 6ml de la disolución y echarla en un matraz aforado. Ahora enrasamos hasta 150 ml con agua destilada, es decir, diluyéndola 25 veces (150:6 ) y así obtendremos una disolución de 150 mL a 0,2 N a partir de una disolución de 5N en el laboratorio.

Puedes explicar qué es un factor de dilución

Corresponde a la proporción de muestra tomada y al volumen en el q se diluye. Por ejemplo, si tenemos un litro de agua y keremos hacer un análisis de cloruro, sin q se tome una cantidad de dicho litro. La titulación de nitrato de plata, tomamos 10ml de agua de la mezcla y después añadimos 40 ml de agua libre de clururo y tenemos 50ml. Se procede a a titulación y para calcular el contendo de la muestra, se utiliza el factor de dilución, el cual obtendremos multiplicand los 50ml entre los 10ml del volumen; el factor de dilución será 50/10=5, el nº de veces que diluimos la muestra de agua.

Describe brevemente cómo funciona y la correcta utilización para dispensar un volumen dado de una pipeta automática en el laboratorio

Ajustar el volumen girando la rueda hasta que en la escala aparezca el volumen deseado.  Colocar una punta de plástico (adecuada) en la parte de la pipeta haciendo una leve presión para lograr un buen ajuste. Pasos a seguir: 1. Oprimir el botón pulsando con el dedo pulgar hasta el primer tope, y sin soltarlo introducir verticalmente en la pipeta. 2. Soltar lentamente el botón y después de unos segundos retiramos verticalmente la pipeta del likido, deslizando la punta contra la pared del recipiente. 3. De igual modo, colocamos el likido en el recipiente deseado y pulsamos el botón hasta el primer tope. Después, sin soltar el botón, vaciamos la pipeta hasta el segundo tope. 4. Retiramos la pipeta de la misma forma que antes.

Cuando se trata de clonar genomas ¿por qué es importante que las digestiones sean parciales?

La digestión parcial permite que no todos los sitios posibles susceptibles de corte por las enzimas de restricción sean cortadas y formen fragmento solapantes. Esto asegura que todas las  secuencias sean clonadas, y permiten la construcción de mapas físicos mas largos a partir de los datos de secuenciación

.


 Razona brevemente por qué, en términos estructurales, la mayoría de las interacciones entre proteínas y ADN se dan en el surco mayor de éste último

En la doble cadena se distingue un surco mayor y uno menor. La mayor capacidad informativa se encuentra en  elsurco mayor como consecuencia de la mayor variabilidad de los grupos kimicos que presenta:
En el surco maor los grupos kimicos presentes especifican la identidad del par de bases, pudiendo distinguir hasta los pares de bases A-T de los T-A, permitiendo así que las proteínas reconozcan sin ekivocacion las secuencias de ADN sin tener que abrir la doble hélice

Deja una respuesta

Tu dirección de correo electrónico no será publicada. Los campos obligatorios están marcados con *

Este sitio usa Akismet para reducir el spam. Aprende cómo se procesan los datos de tus comentarios.